تراریختی ای.کولای E.coli به روش تکانه گرمایی

تراریختی ای.کولای E.coli به روش تکانه گرمایی1- باکتری( 100 میکرو لیتر) را در یخ بگذارید تا از حالت انجماد بیرون رود.2- 5 میکرو لیتر پلاسمید دارای ژن مورد نظر را به باکتری درون لوله میکروفیوژ ( ای- لوله) اضافه کنید.3- به مدت 20 دقیقه در یخ نگهداری کنید.4- در دمای 42 درجه سانتیگراد به مدت 30 ثانیه به باکتری تکانه گرمایی وارد کنید.5- برای دست کم 5 دقیقه باکتری را در یخ نگهدارید.6- 125 میکرولیتر محیط ال.بی (یا آر.تی.سوک) به آن بیافزایید.7- به مدت یک ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد تکان بدهید.8- باکتری را روی محیط جامد مورد نظرتان در ظرف پتری پخش کنید و در طول شب در دمای 37 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.9- فردا صبح کلنی های باکتری را بررسی کنید.10- توجه کنید باکتری هایی که پس از مدتی طولانی رشد می کنند قابل اعتماد نیستند یا اگر دیر به باکتریها سرکشی کنید کلنی های باکتری های تراریخت شده پیر می شوند و اطراف آنها کلنی های ماهواره رشد می کنند.باز کردن یخ بدون آسیب رساندن به جاندار یا توالی نوکلئوتید یخزده : thawتکانه گرمایی :heat shockطول شب :O/N