پاکلی تاکسل و بیوتکنولوژی تولید آن در گیاه و قارچ

پاکلی تاکسل و بیوتکنولوژی تولید آن در گیاه و قارچView more presentations from davarpanah. (tags: paclitaxel taxol)

تراریختی ای.کولای E.coli به روش تکانه گرمایی

تراریختی ای.کولای E.coli به روش تکانه گرمایی1- باکتری( 100 میکرو لیتر) را در یخ بگذارید تا از حالت انجماد بیرون رود.2- 5 میکرو لیتر پلاسمید دارای ژن مورد نظر را به باکتری درون لوله میکروفیوژ ( ای- لوله) اضافه کنید.3- به مدت 20 دقیقه در یخ نگهداری کنید.4- در دمای 42 درجه سانتیگراد به مدت 30 ثانیه به باکتری تکانه گرمایی وارد کنید.5- برای دست کم 5 دقیقه باکتری را در یخ نگهدارید.6- 125 میکرولیتر محیط ال.بی (یا آر.تی.سوک) به آن بیافزایید.7- به مدت یک ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد تکان بدهید.8- باکتری را روی محیط جامد مورد نظرتان در ظرف پتری پخش کنید و در طول شب در دمای 37 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.9- فردا صبح کلنی های باکتری را بررسی کنید.10- توجه کنید باکتری هایی که پس از مدتی طولانی رشد می کنند قابل اعتماد نیستند یا اگر دیر به باکتریها سرکشی کنید کلنی های باکتری های تراریخت شده پیر می شوند و اطراف آنها کلنی های ماهواره رشد می کنند.باز کردن یخ بدون آسیب رساندن به جاندار یا توالی نوکلئوتید یخزده : thawتکانه گرمایی :heat shockطول شب :O/N

رنگ 2x غلظت برای تایید کیفیت آر.ان.ای

هر گاه خواستید کیفیت آر.ان.ای را ببینید این رنگ را با غلظت2 ایکس تهیه کنید و پس از این که آر.ان.ای را در 65 درجه سانتیگراد به مدت10 دقیقه گرما دادید بلافاصله آن را به یخ منتقل کنید و پس از سانتریفوژ به مدت کوتاه (اسپین دون) رنگ 2 ایکس غلظت را به آر.ان.ای اضافه کنید و آر.ان.ای  را در مینی ژل نیم ایکس تی.بی.ای -آگاروز 1.5 درصد ران کنید.ترکیب نهایی رنگ:فرمامید 95%اس.دی.اس 0.025% بی.پی.بی (بروموفنل بلو) 0.025% ایکس.سی.اف.اف(گزیلن سیانول اف.اف) 0.025%ای.تی- بی.آر (اتیدیوم بروماید) 0.025%ای.دی.تی.ای 0.5 میلی مولار